Протокол Крио+



CryoBiologicДля защиты от повреждающего действия низких температур в процессе криоконсервации клетки предварительно смешивают с криопротектором. Чаще других для этой цели применяют 10—20% раствор глицерина (например, SpermFreeze Medium, Ferti Pro, Бельгия).

Среда для криоконсервации  TEST‑Yolk Buffer (Irvine Scientific, США) содержит компонент, близкий по химическому составу к яичному желтку. Hallak с соавт. (2000) в исследовании на 10 здоровых мужчинах провели оценку качества спермы перед погружением ее в жидкий азот (-196˚С) и после оттаивания с каждым из указанных криопротекторов (таблица 1).

Качество спермы определяли по параметрам выживаемости, подвижности и морфологии сперматозоидов. Выживаемость рассчитывали при помощи теста с эозином. Подвижность оценивали спустя разные промежутки времени от момента оттаивания и удаления криопротектора: 0, через 60, 120 и 180 мин. Оценку морфологии сперматозоидов осуществляли по рекомендациям ВОЗ 1992 г., по строгим критериям Крюгера.

Таблица 1

tablecryoplus

См. так же: 

http://www.clevelandclinic.org/ReproductiveResearchCenter/docs/agradoc77.pdf
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/6892336
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/6892336


В результате, после извлечения спермы с криопротектором из жидкого азота (‑196˚С) и оттаивания подвижность сперматозоидов резко снижалась во всех образцах. Авторы утверждают, что подвижность после криоконсервации снижается на 30-40%. Даже через 180 мин после оттаивания число подвижных сперматозоидов было значительно больше при использовании
TESTYolk Buffer, чем в среде SpermFreeze.
Сперматозоидов с правильной морфологией было значительно больше в образцах, замороженнных на TEST‑Yolk Buffer. Предполагается, что один из его компонентов защищает мембраны клеток от токсического действия низких температур и свободных радикалов.


На основании полученных лабораторией криобанка данных (таблица 2), нами был разработан протокол КРИО+ для криоконсервации (заморозки) спермы низкого качества с целью сохранения максимального количества живых сперматозоидов после разморозки в будущем. 

Таблица 2

 

 

Параметры оценки

После оттаивания  (в % от изначального числа клеток)

 

Стандартный криопротектор Sperm Freeze с глицерином

 

Специальная формула КРИО+ с желтком

 

Количество живых клеток

20-55 %

40-65 %

Общая подвижность сперматозоидов

30-60 %

45-70 %

Количество прогрессивно подвижных клеток

10-40 %

30-80 %



 

Тихонов Е.А., криобанк Biologic

2014/2015